推荐以下用户使用该试剂盒：

• 想要优化测序实验，提高通量
• 需要控制读长
• 想要利用上游处理工序（比如，片段大小选择或全基因组扩增）的用户。

连接测序试剂盒（Ligation Sequencing Kit）提供的方法灵活，可使用dsDNA样本（比如，gDNA，cDNA或扩增子）来构建测序文库。构建文库的方法非常简单：通过使用NEBNext 末端修复/加dA 尾模块试剂盒（NEBNext End Repair/dA-tailing module）来进行DNA末端修复和dA尾添加，然后把试剂盒中提供的测序接头连接到制备好的DNA末端。

连接测序试剂盒（Ligation Sequencing Kit）特征：

该试剂盒已针对产生最大通量进行了优化。如需获得最高数据产量，我们建议纯DNA的起始量为200 fmol。开始时使用更低量的起始样本或不纯样本，可能会影响文库构建效率且降低测序通量。

用户可以首先使用1μg的gDNA（使用Qubit荧光定量仪进行定量）或100-200fmol较短输入片段，如扩增子或cDNA。若实验需要长读长，则推荐首先使用全长gDNA，不推荐也不需要片段化/剪切。请注意：若需要长读长，则起始样本中必须存在长片段。建议使用Nanodrop测量A260/280和A260/230比率以确定样本纯度，建议样本应符合以下标准：

· A260/280 = 1.8

· A260/230 = 2.0-2.2

连接测序试剂盒（Ligation Sequencing Kit）可与上游处理工序兼容，例如，通过序列捕获进行靶向富集、全基因组扩增（适用于样本起始量少于1ng的应用）和片段大小选择（例如，使用BluePippin富集特定长度片段）。由于片段大小选择的过程可能会耗费样本，建议增加使用的样本起始量。

在通过使用连接测序试剂盒（Ligation Sequencing Kit）（含或不含g-TUBE片段化）或片段大小选择（无片段化）构建大肠杆菌（E.coli）文库时观察到的相对测序产量（A）和典型读长长度直方图（B，C和D）。

无需PCR和WGA的工作流程可以消除扩增偏好性，保留碱基修饰信息，用户可以通过使用Nanopore Community开发的相关软件来对该信息进行分析。

进一步考虑：

在开始时使用更低量的起始样本或不纯样本，可能会影响文库构建效率并降低测序通量。在样本量有限的情况下，可用PCR生成更多的起始样本材料。此外，在样本不纯和文库构建效率低下的情况下，PCR将选择合适的分子作为模板进行扩增。原始杂质被丢失或稀释。我们经常可以看到，测序结果不佳的样本可以同通过加入PCR步骤而得到改善。但是，如果PCR方法为文库构建的主要方法，则建议使用PCR扩增测序试剂盒（PCR Sequencing Kit），或是快速PCR条码试剂盒（Rapid PCR Barcoding Kit）。

虽然任何dsDNA都可以用作连接测序试剂盒（Ligation Sequencing Kit）的模板，但如果用户计划定期对扩增子或cDNA进行测序，应考虑使用附带有专用方案的特定试剂盒，以简化实验室工作流程并获得优质的结果。如果使用扩增子，推荐联合使用我们的四引物PCR实验方案（four-primer PCR protocol）和PCR扩增测序试剂盒（PCR Sequencing Kit）。若需要进行扩增子的混样文库测序分析，请使用PCR条码试剂盒（PCR Barcoding Kit）。若为cDNA，推荐使用cDNA-PCR测序试剂盒（cDNA-PCR Sequencing Kit）或cDNA直接测序试剂盒（Direct cDNA Sequencing Kit）。

Oxford Nanopore technologies视该产品的使用寿命为自客户收到产品之日起的3个月。